在實驗室樣品分析里，比色法試劑盒有著廣泛的應(yīng)用，它借助顯色反應(yīng)，把待測物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)變成顏色的深淺程度，之后利用儀器去測量吸光度來進(jìn)行定量，這種方法的操作相對而言較為簡便，適合日常的批量檢測，然而，要是想讓結(jié)果準(zhǔn)確又可靠，還需要掌握幾個關(guān)鍵的細(xì)節(jié)。
比色法試劑盒怎么用
當(dāng)拿到試劑盒之后，需先去仔細(xì)閱讀說明書，進(jìn)而確認(rèn)所需樣品的前處理步驟。一般情況下需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品以及空白對照的配制，而后按照試劑添加的順序依次加入比色皿或者微孔板之中。每一次試劑添加完成之后都要輕輕地進(jìn)行混勻，防止產(chǎn)生氣泡，不然的話會對光路造成影響。加樣完成之后要在指定溫度下孵育一定的時間，以使顯色反應(yīng)能夠充分地進(jìn)行。
顯色達(dá)成之后，要盡快地運用酶標(biāo)儀或者分光光度計于所推薦的波長之處去讀取吸光度。留意比色皿的光滑的面要對準(zhǔn)光路，而且每一次測量之前要用空白液來調(diào)零。要是樣品吸光度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，那就需要進(jìn)行稀釋之后再重新測量。記錄下數(shù)據(jù)之后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程來計算樣品濃度。
比色法試劑盒結(jié)果不準(zhǔn)原因
試劑保存不當(dāng)或者操作失誤的情況下，結(jié)果偏差常常會出現(xiàn)。比如說，試劑盒長時間暴露在高溫或者光照下面，顯色劑就會失效。另外，加樣量不準(zhǔn)確也是非常關(guān)鍵的，建議使用校準(zhǔn)過的移液器，并且要定期進(jìn)行維護。要是樣品本身存在顏色或者渾濁的情況，需要做樣品空白來扣除本底，不然結(jié)果就會偏高。
把控反應(yīng)時間若不嚴(yán)謹(jǐn)，也會致使誤差出現(xiàn)。部分試劑盒規(guī)定顯色之后5分鐘之內(nèi)要讀取數(shù)值，倘若時間持續(xù)太久，顏色就會漸漸褪去。溫度產(chǎn)生波動同樣會對反應(yīng)速率造成影響，特別是酶聯(lián)類的試劑盒，保持恒溫孵育是絕對必要的。一旦察覺到有異常值，就要重新展開檢測，并且查驗標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性程度。
比色法試劑盒如何選擇
按照待測物質(zhì)的類別，選定相匹配的試劑盒。市售有專為檢測蛋白質(zhì)、核酸、金屬離子、抗氧化能力等各異靶標(biāo)的比色法試劑盒。查看產(chǎn)品說明里的檢測限以及線性范圍，保證涵蓋你的樣品濃度區(qū)間。優(yōu)先挑選穩(wěn)定性良好、批間差微小的品牌，能夠減小重復(fù)實驗的困擾。
考慮一下，試劑盒的組分齊備與否，有些試劑盒僅僅提供顯色液以及標(biāo)準(zhǔn)品，緩沖液和輔料得自己準(zhǔn)備，而全套的試劑盒含有所有必需的溶液，使用起來更叫人省心，同時注意留意試劑盒的保存條件是2到8攝氏度冷藏，還是常溫運輸，依據(jù)實驗室條件做出恰當(dāng)選擇。
