ELISA檢測(cè)試劑盒，是實(shí)驗(yàn)室常用工具，其原理是基于抗原抗體特異性反應(yīng)，借助酶催化底物顯色來(lái)進(jìn)行定量或者定性分析。在實(shí)際操作當(dāng)中，從試劑盒選擇開始，一直到結(jié)果判讀為止，每一個(gè)步驟都直接對(duì)數(shù)據(jù)可靠性產(chǎn)生影響。
怎么選ELISA檢測(cè)試劑盒
面對(duì)著諸多的品牌以及規(guī)格，首要的是要清晰地明確檢測(cè)樣本的類型以及靶標(biāo)分子，不同的試劑盒針對(duì)血清、細(xì)胞上清或者組織勻漿的兼容性存在著顯著的差異，需要去核對(duì)說(shuō)明書之中的驗(yàn)證數(shù)據(jù)，其次要關(guān)注靈敏度以及檢測(cè)范圍，要保證目標(biāo)濃度處于標(biāo)準(zhǔn)曲線的中間區(qū)域，防止邊緣效應(yīng)所帶來(lái)的誤差。
ELISA實(shí)驗(yàn)操作關(guān)鍵步驟
加樣的時(shí)候要使用校準(zhǔn)過(guò)的移液器，而且得垂直懸空著加到孔底，務(wù)必避免出現(xiàn)氣泡或者濺射現(xiàn)象。洗板的操作會(huì)決定背景噪音的高低，推薦運(yùn)用自動(dòng)洗板機(jī)并且調(diào)整吸液頭的位置，每一個(gè)孔浸泡的時(shí)間至少要有30秒。孵育階段要嚴(yán)格把控溫度，用封板膜防止液體蒸發(fā)，振蕩速度建議設(shè)置在的500-600rpm這個(gè)范圍，以此來(lái)保證反應(yīng)的均勻性。
常見問(wèn)題與解決方法
因其洗板不充分或者封閉液過(guò)了保質(zhì)期，所以導(dǎo)致了高背景值，此時(shí)能夠加大洗液吐納的次數(shù)，并且去更換新鮮的封閉液。標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差常常是由于倍比稀釋誤差所引發(fā)而來(lái)的，故而建議使用多道移液器，同時(shí)逐孔進(jìn)行混勻工作。顯色過(guò)分深或者過(guò)分淺的情況，需要去核查底物保存方面的條件，防止出現(xiàn)反復(fù)凍融的現(xiàn)象，必要之時(shí)重新配制終止液。
如何保證結(jié)果重復(fù)性
每次進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)批次，都一定要設(shè)置復(fù)孔以及質(zhì)控品，計(jì)算得出的變異系數(shù)應(yīng)當(dāng)是小于百分之十五的。試劑盒的各個(gè)組分，需要按照說(shuō)明書的要求，進(jìn)行分裝保存，以此來(lái)避免因?yàn)榉磸?fù)打開蓋子而引入污染物。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后，要及時(shí)去讀取吸光度，要是延遲進(jìn)行檢測(cè)，就需要在避光的條件下，保存于四攝氏度。要記錄下所有的操作參數(shù)，方便后續(xù)進(jìn)行溯源以及優(yōu)化。
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