充當(dāng)生命科學(xué)研究基石工具的細(xì)胞株，其質(zhì)量跟操作規(guī)范性直接對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性起著決定作用。好多研究者于采購以及培養(yǎng)過程里容易把關(guān)鍵細(xì)節(jié)給忽視掉，從而致使出現(xiàn)數(shù)據(jù)波動(dòng)以及實(shí)驗(yàn)失敗情況。能夠顯著提高研究效率的是掌握細(xì)胞株的基本特性和核心處理技巧。
細(xì)胞株如何避免支原體污染
最隱蔽的細(xì)胞培養(yǎng)問題是支原體污染，常規(guī)顯微鏡根本無法察覺，培養(yǎng)基也不會(huì)渾濁。建議每?jī)蓚€(gè)月篩查一回，定期用PCR法或者熒光染色試劑盒檢測(cè)。操作時(shí)要嚴(yán)格踐行無菌流程，不同的細(xì)胞株得用獨(dú)立器具，防止交叉接觸。在培養(yǎng)基里加入預(yù)防性抗生素，像BM環(huán)素，能降低污染發(fā)生概率。
細(xì)胞株凍存需要掌握哪些技巧
細(xì)胞株的長(zhǎng)期存活率受凍存效果的直接影響，配制含有10%二甲基亞砜以及20%優(yōu)質(zhì)血清的凍存液，采用程序降溫盒按照每分鐘下降1℃的速率緩慢冷卻至-80℃，之后轉(zhuǎn)入液氮罐進(jìn)行保存，復(fù)蘇之時(shí)從液氮里取出凍存管，馬上在37℃水浴中快速搖晃解凍，使用預(yù)溫培養(yǎng)基稀釋以除去DMSO，每株細(xì)胞至少留存5支早期代次凍存管來防止遺傳漂變。
細(xì)胞株傳代密度怎么控制最合適
傳代時(shí)密度不合適會(huì)致使細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)變化或者增殖停止，貼壁細(xì)胞一般等到融合度處于80%至90%的時(shí)候開展傳代，懸浮細(xì)胞是根據(jù)密度翻倍時(shí)間來判斷的，接種過于稀疏會(huì)讓遲滯期變長(zhǎng)，過于密集會(huì)造成接觸抑制甚至老化，去查閱細(xì)胞株對(duì)應(yīng)的文獻(xiàn)或者供應(yīng)商說明書，弄清楚推薦的種植密度范圍，并且通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最優(yōu)參數(shù)，以此維持細(xì)胞穩(wěn)定增殖。
細(xì)胞株身份鑒定為什么必不可少
長(zhǎng)期傳代，極易導(dǎo)致細(xì)胞株交叉污染，長(zhǎng)期混用，極易導(dǎo)致標(biāo)簽錯(cuò)誤。要利用短串聯(lián)重復(fù)序列分析技術(shù)進(jìn)行DNA指紋鑒定，才可準(zhǔn)確確認(rèn)細(xì)胞真實(shí)身份。研究發(fā)現(xiàn)，常用細(xì)胞株中，超過百分之三十被HeLa等其他細(xì)胞系污染。實(shí)驗(yàn)開始前要進(jìn)行一次鑒定，每傳代十次左右也要進(jìn)行一次鑒定，以此確保研究資源的有效性。若忽略這一步驟，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)都可能失去可比性。
可可.jpg)
