去年夏天，有位同事小李，他經(jīng)歷了職業(yè)生涯的一場“渡劫”?，F(xiàn)在，他不但成了我們項目組的核心骨干，而且手頭的實驗做得既快又準(zhǔn)。這所有的轉(zhuǎn)折，都源自他對一個基礎(chǔ)實驗工具，也就是ELISA試劑盒的深刻理解以及重新選擇。要是你也因?qū)嶒灁?shù)據(jù)不穩(wěn)定、重復(fù)性差而頭疼，或者正為挑選哪家試劑盒供應(yīng)商而糾結(jié)，那么小李的故事，也許能給你帶來一些切實的啟發(fā)。
ELISA試劑盒怎么選才能不踩坑？
畢業(yè)于碩士的小李，一入職就來到了我們這家生物科技公司，承擔(dān)起腫瘤標(biāo)志物檢測相關(guān)的研發(fā)工作，其中ELISA是他日常使用，頻率最高的方法里的其中之一。最開始的時候，他和眾多新人沒啥兩樣，覺著這東西就像是個“黑盒子”，按照說明書進行加樣、孵育、洗板、讀值，出來啥結(jié)果那就是啥結(jié)果。那時他用的是一款在市面上極為常見的進口品牌試劑盒，價格可不便宜，然而用起來卻總感覺有點“玄學(xué)”。有時板內(nèi)重復(fù)性挺好，可隔一周再做，標(biāo)準(zhǔn)曲線飄得連親媽都認不出來，回收率實驗也同樣做得亂七八糟。那一陣子，他所負責(zé)的項目進展?fàn)顩r極為嚴重地滯后了，每一周舉行的組會他都好似處于“渡劫”的狀態(tài)，被老板提問后變得完全說不出話來。
他曾一度懷疑自身操作手法存在問題，將SOP（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程）反復(fù)查看，就連使用移液器時都小心翼翼到了近乎神經(jīng)質(zhì)的程度，只是問題依舊時好時壞。直至有一回，他在清洗酶標(biāo)板之際，無意間察覺到不同孔道的洗脫液殘留有著顯著區(qū)別，在此之后才把目光聚焦于試劑盒本身。他開始有所察覺，也許并非是“手”的過錯，而是“槍”以及“子彈”的問題。而這個所謂的“子彈”，便是ELISA試劑盒。
國產(chǎn)ELISA試劑盒和進口的到底差在哪？
為了將問題予以解決，小李著手瘋狂地查閱資料，在各類科研論壇中不停地混跡。他忽然察覺，眾多人和他一樣有著類似的困惑。論壇當(dāng)中有提到，一些國產(chǎn)試劑盒開始崛起，在關(guān)鍵參數(shù)方面已并不輸給進口品牌，特別是在批間差以及穩(wěn)定性控制這兩方面，甚至具備更為突出的優(yōu)勢。這對他“進口必定好”的固有認知形成了顛覆。因此他做出決定，不能僅僅聽?wèi){別人去言說，必須親自動手開展一次系統(tǒng)的“測評”。
有一個人，他背著眾人，申請了一筆數(shù)額不算大的預(yù)算，于紛紜市場之中，精心挑選出三款在口碑方面較為良好的國產(chǎn) ELISA 試劑盒，再加上他一直以來都在使用的那款進口試劑盒，針對同一指標(biāo)，也就是被稱作人白細胞介素 -6（IL -6）的這個對象，開展了一回“盲測”。其測試的具體地點便是位于我們公司三樓的研發(fā)實驗室，測試所歷經(jīng)的時間跨度長達一個月，且此測試被劃分成了四個批次來依次進行。而關(guān)于此次測評所涉及的維度，是十分細致的：涵蓋了標(biāo)準(zhǔn)品的線性范圍這一方面、靈敏度這一要點、板內(nèi)板間精密度這一考量因素、加標(biāo)回收率這一環(huán)節(jié)，以及最為關(guān)鍵重要的一點——不同批次試劑盒之間標(biāo)準(zhǔn)曲線的重復(fù)性這一內(nèi)容。
過程相較于他所想象的而言那是繁瑣多了僅只是數(shù)據(jù)的整理事項以及分析事宜就耗費了他好些個周末并且結(jié)果卻讓他大為驚愕對于國產(chǎn)貨其中一款試劑盒它在靈敏度以及線性范圍方面跟進口品牌處于持平狀態(tài)然而在批間差這個十分關(guān)鍵的指標(biāo)上展示出了令人驚嘆的穩(wěn)定性進行四批試劑的曲線擬合度R2值相互反差還不足0.005再說那款進口試劑盒后續(xù)兩批的曲線顯著地出現(xiàn)了偏差這樣的結(jié)果使得他對國產(chǎn)試劑盒的那些工藝控制水平不由得刮目相看。
如何驗證ELISA試劑盒的準(zhǔn)確性和特異性？
測評結(jié)果給予了小李信心，然而他明白，僅有性能數(shù)據(jù)是不行的，理應(yīng)置于真實的樣品檢測環(huán)境當(dāng)中去加以驗證。他手中恰好存有一批臨床前研究的血清樣本，已知濃度的樣本數(shù)量不多，不過足以開展一次初步驗證。他運用那款表現(xiàn)最為出色的國產(chǎn)試劑盒以及原來的進口試劑盒，針對這批樣本進行了平行檢測。
遇到波折的是驗證過程，在檢測一批高脂血癥的樣本時，使用國產(chǎn)試劑盒，最初本底值偏高，小李沒簡單否定而是聯(lián)絡(luò)試劑盒廠家求助技術(shù)支持，對方專業(yè)很快給出建議，樣本脂質(zhì)干擾，建議適當(dāng) diluted 樣本或高速離心取中層清液再檢測，小李照做干擾消除，檢測結(jié)果與進口試劑盒一致性好，部分低濃度樣本國產(chǎn)試劑盒重復(fù)性更突出。
經(jīng)由這樣子的深度驗證，小李得以明白，對于一個試劑盒進行評估之時，不能單單去看廣告或者品牌，務(wù)必要結(jié)合實際應(yīng)用的場景，對其抗干擾能力以及技術(shù)支撐所展現(xiàn)的響應(yīng)速度展開考察。一款稱得上好的試劑盒，不但要“準(zhǔn)”，而且要“穩(wěn)”，甚至在碰到了問題的情況下能夠“找到人，具備解決辦法”。
不同樣本類型前處理要注意什么？
對小李而言，是經(jīng)過一番測評，跟著再有一次驗證之后，他才正式于項目當(dāng)中切換并使用了那款國產(chǎn)的 ELISA 試劑盒。使用之后，他對應(yīng)所得的數(shù)據(jù)質(zhì)量是以那種肉眼能夠看得到的速度實現(xiàn)穩(wěn)定狀態(tài)的，與此同時，項目的進展程度也再次回歸到正確的軌道上來。然而，他可并沒有在取得這樣的成效之后就停止不前了，反而是進一步積累起來了一套屬于他自己的“心得”。
在樣本前處理方面，他變得極其講究。針對細胞培養(yǎng)上清，他會保證細胞碎片去除得干干凈凈，防止出現(xiàn)假陽性；針對血清血漿，會詳盡記錄分離以及凍融的次數(shù)和條件，他覺得這是確保數(shù)據(jù)具有可比性的根基；針對組織勻漿液，他會嚴格統(tǒng)一勻漿的緩沖液體系以及離心條件，并且察覺到，不同試劑盒對同一類復(fù)雜樣本的兼容性可能是存在差異的，預(yù)先做兼容性測試可以省去后續(xù)諸多麻煩。他把這些細節(jié)都寫入了項目的實驗記錄本子里，構(gòu)建成了自己團隊的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。
ELISA實驗操作中最容易忽略的細節(jié)是哪個？
小小李平時常常講，要將一個試劑盒運用得恰到好處，其中七分在于挑選產(chǎn)品，三分在于進行操作。而于操作期間最容易被忽視掉的，恰恰正是最為基礎(chǔ)的步驟——孵育。他摒棄了先前一邊孵育一邊去做別的一些事情的習(xí)慣，對每一步的反應(yīng)時間以及溫度都進行嚴格把控。特別是在顯色之后的終止反應(yīng)方面，他要求組員務(wù)必計時，要精確到秒才行，因為終止時間存在的細微差別，會直接對最終讀值產(chǎn)生影響。
他對于酶標(biāo)儀的維護以及校準(zhǔn)也開始變得用心起來，會定期去清潔光路，還會使用校準(zhǔn)板開展校準(zhǔn)工作，以此來保證儀器 的狀態(tài)處于最佳，他這般說道：不能夠要求試劑盒在性能達到滿值的同時，還要去忍受一臺狀態(tài)不好的儀器，優(yōu)良的馬匹需要配上優(yōu)質(zhì)出色的馬鞍。
此刻，小李已然變成我們部門于免疫檢測范疇的“小專家”。每當(dāng)存在新同事為實驗重復(fù)性而發(fā)愁之際，他總是會率先問上一句：“你所使用的是何種試劑盒？是否驗證過了呢？” 他的經(jīng)歷向我們表明，于科研以及研發(fā)的路途上，有時妨礙你的并非高深的理論 ，而是對于基礎(chǔ)工具的挑選以及認知。挑選一個穩(wěn)定、可靠、契合自身的ELISA試劑盒 ，或許就是你實驗取得成功的首要一步 ，也是最為關(guān)鍵的一步。
