上個(gè)月開(kāi)組會(huì)，我看到老張時(shí)，差點(diǎn)沒(méi)能認(rèn)出來(lái)。他是一家分子檢測(cè)公司的研發(fā)骨干，平?？偸且桓本耧枬M(mǎn)的模樣，然而那天，他卻頂著一雙黑眼圈，眉頭緊緊皺著，會(huì)議室里煙霧彌漫，都無(wú)法掩蓋他臉上的疲憊神情。會(huì)后一起抽煙時(shí)，他才向我傾訴苦衷：“兄弟，這次恐怕搞不下去了?！薄?/p>
老張所在的公司規(guī)模不算大，專(zhuān)門(mén)針對(duì)一些高校實(shí)驗(yàn)室、以及第三方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)機(jī)構(gòu)，來(lái)供給分子檢測(cè)的耗材，同時(shí)提供技術(shù)方面的支撐。去年接近年終時(shí)，深圳地區(qū)的分公司承接了一起大的訂單，是為南方的一個(gè)大型水產(chǎn)養(yǎng)殖基地，去研發(fā)一套現(xiàn)場(chǎng)快速病原檢測(cè)的方案。假若這單子能夠成功，不但利潤(rùn)會(huì)十分可觀，更是作為開(kāi)辟新市場(chǎng)的具有代表性的項(xiàng)目。合同已經(jīng)簽署，預(yù)付款業(yè)已收取，客戶(hù)提出的要求非常清晰：從進(jìn)行采樣一直到得出結(jié)果，整個(gè)操作流程一定要在兩小時(shí)之內(nèi)完成，而且準(zhǔn)確率也必須要有保證。核心當(dāng)中的難點(diǎn)，恰恰就卡在DNA擴(kuò)增這個(gè)環(huán)節(jié)之上。
傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增，動(dòng)不動(dòng)就要一兩個(gè)小時(shí)之久，再加上前處理以及后分析環(huán)節(jié)，兩小時(shí)內(nèi)出具報(bào)告簡(jiǎn)直就如同天方夜譚一般。最開(kāi)始的時(shí)候，團(tuán)隊(duì)將全部希望都寄托在了優(yōu)化反應(yīng)體系這件事上，調(diào)整鎂離子的濃度，更換使用不同廠(chǎng)家的聚合酶，一遍又一遍地去做梯度實(shí)驗(yàn)。在那段日子里，他差不多帶著團(tuán)隊(duì)吃住都在實(shí)驗(yàn)室，夜晚就睡在隔壁會(huì)議室擺放的行軍床上。然而所取得的進(jìn)展非常微小，速度最快的那一次也要85分鐘才能夠完成擴(kuò)增，距離目標(biāo)存在著不小的差距。
快速PCR擴(kuò)增試劑盒能否節(jié)省大量時(shí)間？
明明距目標(biāo)已近在跟前，然而結(jié)果卻毫無(wú)進(jìn)展，這般無(wú)力之感致使整個(gè)團(tuán)隊(duì)士氣低落。老張講，在三月份的某個(gè)夜晚，深圳正下著小雨，他獨(dú)自一人于空蕩蕩的實(shí)驗(yàn)室里望著跑膠結(jié)果發(fā)呆，心里思索了諸多。是直接去采購(gòu)市面上的快速PCR試劑嗎？可是現(xiàn)有的產(chǎn)品，要么價(jià)錢(qián)高昂，單次檢測(cè)成本劇增客戶(hù)必定不會(huì)接受；要么便是宣稱(chēng)的時(shí)間存在水分，實(shí)際使用時(shí)穩(wěn)定性欠佳，重復(fù)性不佳。他于技術(shù)論壇以及行業(yè)社群之中也詢(xún)問(wèn)了一番，同行們所發(fā)布的帖子多數(shù)是針對(duì)遇上同樣問(wèn)題的抱怨，而真正切實(shí)有效的解決方案資料極為稀少。日子一天天地流逝，壓力愈發(fā)增大。在客戶(hù)每周一次的進(jìn)度溝通會(huì)上那再三的追問(wèn)，使他更是感覺(jué)如坐針氈，極為難受。
幾乎就要跟老板建議“壯士斷腕”放棄那個(gè)項(xiàng)目之際，一次偶然的機(jī)會(huì)冒出來(lái)了，四月初的時(shí)候，我們前往上海參加一場(chǎng)行業(yè)展會(huì)，就在展會(huì)快要結(jié)束之時(shí)，我于一個(gè)不太顯眼的展臺(tái)前看到有廠(chǎng)商在演示一款新品，他的展板之上寫(xiě)著快速PCR擴(kuò)增試劑盒，是為現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)等場(chǎng)景專(zhuān)門(mén)打造，具備加熱速度快，減少循環(huán)時(shí)間等優(yōu)勢(shì)，我當(dāng)時(shí)心里猛地一動(dòng)，馬上給還正在實(shí)驗(yàn)室煎熬著的老張發(fā)送了一條信息，附上了展臺(tái)的地址以及聯(lián)系人的名片。
實(shí)際上，我有很長(zhǎng)一段時(shí)間未曾深入探究過(guò)這類(lèi)產(chǎn)品，因而對(duì)于市面上這些快速PCR擴(kuò)增試劑盒的特性不太明晰，不過(guò)下意識(shí)里覺(jué)得這或許對(duì)他而言是個(gè)契機(jī)。依據(jù)我的查閱情況來(lái)看，這類(lèi)試劑盒的關(guān)鍵之處在于其預(yù)混的反應(yīng)體系運(yùn)用了經(jīng)過(guò)特別改造的熱穩(wěn)定性聚合酶，再配合優(yōu)化后的緩沖液配方，能夠在確保擴(kuò)增效率以及特異性的條件下，明顯提高升降溫的速度，進(jìn)而把整個(gè)擴(kuò)增進(jìn)程縮短至30分鐘左右，甚至更短一些。如那種老的 ，樣品處理所需時(shí)間不那么長(zhǎng) ，人員操作起來(lái)較為便捷 ，能節(jié)省下數(shù)量可觀的時(shí)間之類(lèi)的話(huà)語(yǔ) ，或許都屬于其在宣傳時(shí)所提及的平常優(yōu)勢(shì)。
哪里可以采購(gòu)到可靠的快速PCR擴(kuò)增試劑盒？
有個(gè)叫老張的家伙，對(duì)我隨手予以提供的這條線(xiàn)索相當(dāng)重視，他全然不顧周末正當(dāng)時(shí)，馬上就聯(lián)系了那家廠(chǎng)商，還去索要樣品以及詳細(xì)的技術(shù)參數(shù)文檔。然而他并未貿(mào)然直接去使用，這乃是他多年從事研發(fā)過(guò)程中慢慢養(yǎng)成的嚴(yán)謹(jǐn)習(xí)慣?！靶值?，并非是我不相信你所介紹的那些東西，”后來(lái)他跟我講道，“畢竟這是關(guān)鍵項(xiàng)目，倘若試劑盒出現(xiàn)問(wèn)題，那我們之前付出的所有努力可就全都付諸東流了。我必須得先為它把把關(guān)才行?！薄?/p>
他促使對(duì)方率先安排送去了幾份小樣過(guò)來(lái)，收到之后，他親自著手設(shè)計(jì)驗(yàn)證方案，并未馬上將其應(yīng)用于他們的水產(chǎn)病原靶標(biāo)之上，而是首先采用標(biāo)準(zhǔn)的人類(lèi)基因片段以及幾個(gè)常見(jiàn)的微生物質(zhì)控品去進(jìn)行測(cè)試，他聲稱(chēng)那幾日，半個(gè)實(shí)驗(yàn)室的資源都為他調(diào)配用以開(kāi)展這個(gè)平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。在同一臺(tái)機(jī)器上，運(yùn)用他們?cè)茸孕信渲玫捏w系，使用進(jìn)口的某品牌通用試劑盒，接著使用這個(gè)新的快速PCR擴(kuò)增試劑盒，運(yùn)行同樣的循環(huán)數(shù)，對(duì)比Ct值、擴(kuò)增曲線(xiàn)、熔解曲線(xiàn)以及最終的電泳條帶。結(jié)果迅速呈現(xiàn)出來(lái)：新試劑盒的擴(kuò)增時(shí)長(zhǎng)穩(wěn)定處于28至32分鐘的范圍，相較于他們的自配體系快了將近一小時(shí)；其擴(kuò)增效率、特異性均與進(jìn)口標(biāo)桿產(chǎn)品不相上下，甚至在某些高GC含量的模板上展現(xiàn)出更為穩(wěn)定的表現(xiàn)。
結(jié)果使老張心里有了底，他經(jīng)由行業(yè)協(xié)會(huì)的朋友側(cè)面去打聽(tīng)那家廠(chǎng)商的口碑，確認(rèn)并非是那種僅有“PPT產(chǎn)品”的空殼公司。上周，他帶著一份詳細(xì)的評(píng)估報(bào)告，以及初步的合作方案，飛去了無(wú)錫，直接去參觀那家試劑盒生產(chǎn)商處于惠山區(qū)的匹配精密儀器產(chǎn)品眾多的生產(chǎn)車(chē)間。他親眼查看了他們的原料質(zhì)檢，還有生產(chǎn)分裝以及環(huán)境控制，心里最后的石頭才落了地。
如何驗(yàn)證快速PCR擴(kuò)增試劑盒的擴(kuò)增效果？
回來(lái)之后，團(tuán)隊(duì)馬上進(jìn)行轉(zhuǎn)向，他們手中的核心任務(wù)在于，將那“外源性”的快速PCR擴(kuò)增試劑盒，同他們針對(duì)水產(chǎn)病原（像是對(duì)蝦白斑綜合征病毒）所設(shè)計(jì)好的特異性引物探針，以及經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)化的樣本快速裂解提取步驟，毫無(wú)縫隙地整合為一個(gè)完整的“樣品輸入，結(jié)果得到”的簡(jiǎn)易傻瓜流程。在驗(yàn)證階段，他們特地從合作的養(yǎng)殖場(chǎng)采集了不同感染程度的真實(shí)病料樣本，并且模擬了當(dāng)場(chǎng)切實(shí)能被發(fā)現(xiàn)存在的各類(lèi)干擾物。
此項(xiàng)工作內(nèi)里的難點(diǎn)之處在于集成以及優(yōu)化，單單只是樣本裂解液殘留針對(duì)快速PCR反應(yīng)所產(chǎn)生的抑制這個(gè)問(wèn)題，他們前前后后調(diào)整了七八回凈化步驟，接著逐個(gè)去做驗(yàn)證，當(dāng)然，在整個(gè)過(guò)程當(dāng)中那個(gè)快速PCR擴(kuò)增試劑盒的表現(xiàn)向來(lái)很“抗造”，擴(kuò)增的時(shí)間穩(wěn)定，結(jié)果的重復(fù)性良好，給了他們充足的試錯(cuò)以及優(yōu)化基礎(chǔ)，老張講，那段日子，盡管加班仍舊很頻繁，不過(guò)大家眼睛里面有光亮了，每天都能夠看見(jiàn)顯著的存心花銷(xiāo)時(shí)間，因?yàn)闀缘梅较蚴钦_的。
他們成功構(gòu)建起一個(gè)完備的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)流程，其中含樣品處理需時(shí)15分鐘 ，DNA進(jìn)行快速釋放與充分純化用時(shí)15分鐘 ，后續(xù)時(shí)間則屬快速PCR擴(kuò)增試劑盒發(fā)揮作用的時(shí)段。整個(gè)流程自接收樣本起始直至獲取可靠的熒光定量PCR結(jié)果 ，總時(shí)長(zhǎng)成功被控制在110分鐘以?xún)?nèi) ，全然達(dá)到了客戶(hù)合同所規(guī)定的要求。上個(gè)月底 ，他們攜帶著整套設(shè)備 ，前去那個(gè)水產(chǎn)養(yǎng)殖基地的塘口旁邊進(jìn)行實(shí)際演示，結(jié)果獲得了客戶(hù)技術(shù)總監(jiān)的高度認(rèn)可。
上周 ，我跟老張一塊吃飯 ，他整個(gè)人的狀態(tài)已然全然不同了 ，變得松弛了好多。聚餐結(jié)束之后 ，這位客戶(hù)還追加購(gòu)買(mǎi)了后續(xù)一年的試劑耗材供應(yīng)合同。對(duì)他來(lái)講 ，攻克這個(gè)項(xiàng)目的意義 ，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不只是完成一筆訂單那般簡(jiǎn)單。他自己總結(jié) ，這次經(jīng)歷使他深切認(rèn)識(shí)到 ，在技術(shù)迭代極為迅速的如今 ，一個(gè)成熟的研發(fā)人員或者團(tuán)隊(duì) ，核心競(jìng)爭(zhēng)力不一定是掌握全部底層技術(shù)從零到一的創(chuàng)新 ，而是在于怎樣高效地識(shí)別 、篩選 ，并且可靠地整合外部已有的優(yōu)秀技術(shù)模塊 ，用以解決自身面臨的特定應(yīng)用問(wèn)題?；蛘呖梢赃@么講，那其實(shí)就是具備了一種能夠“為我所用”的能力。有的時(shí)候，相比較于獨(dú)自創(chuàng)造，對(duì)于現(xiàn)有的方案去進(jìn)行優(yōu)化，甚至是要比發(fā)明更具意義的。
我向他發(fā)問(wèn)，那個(gè)運(yùn)用了眾人成績(jī)的快速PCR擴(kuò)增試劑盒，后續(xù)情形如何呢？他面帶笑容說(shuō)道，其已然成為他們公司面向“快速現(xiàn)場(chǎng)核酸檢測(cè)”這類(lèi)定制化開(kāi)發(fā)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)配置當(dāng)中的一項(xiàng)，而且正與廠(chǎng)商就依據(jù)他們具體應(yīng)用場(chǎng)景的進(jìn)一步定制化合作展開(kāi)探討?！爸T多事宜，改換一種思路，說(shuō)不定就一下子領(lǐng)悟明白了。”。最初，我們的目光僅僅聚焦于自身實(shí)驗(yàn)室那有限范圍的優(yōu)化，沉迷其中，不如跳脫出來(lái)去審視整個(gè)行業(yè)，近來(lái)產(chǎn)品更新?lián)Q代的速度實(shí)在太快了，借助可靠的外部助力，或許才是最為高效的途徑。
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