就用型的PCR試劑盒是將聚合酶、dNTP、緩沖液等這些組分預(yù)先混合好了的，拿到手之后直接添加模板以及引物就能夠上機(jī)。跟傳統(tǒng)的分裝方式相比較而言，它可是省去了反復(fù)進(jìn)行配液以及移液的步驟，特別適合日常的基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。下面從三個(gè)實(shí)際進(jìn)行使用的角度來(lái)談?wù)勊邆涞膬?yōu)勢(shì)以及需要注意的要點(diǎn)。
即用型PCR試劑盒如何減少污染
分裝試劑之際，每當(dāng)開(kāi)啟一回管蓋，便會(huì)增添一次氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)。用于即時(shí)使用方面的PCR試劑盒，把所有的組分封閉于同一管之內(nèi)，你也僅僅只需加入模板以及引物，使得開(kāi)蓋的次數(shù)由四五次降低成一兩次。眾多的產(chǎn)品還采用帶有濾芯的吸頭以及獨(dú)立的小包裝這種方式，從而進(jìn)一步阻斷交叉污染。針對(duì)于痕量模板的檢測(cè)，這樣的設(shè)計(jì)能夠顯著地提升結(jié)果的可靠性。
在實(shí)際開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)里頭，污染常常源自操作所處的環(huán)境，并非試劑自身。那種即用型的產(chǎn)品，削減了人工進(jìn)行配液的環(huán)節(jié)，如此一來(lái)，也就降低了槍頭多次插入試劑瓶的可能性。與專用的潔凈區(qū)域以及加樣流程相互配合，假陽(yáng)性率能夠被壓低到相當(dāng)?shù)偷某潭?。要是你頻繁遭遇非特異性條帶的情況，不妨先嘗試去換用預(yù)混型的試劑。
即用型PCR試劑盒穩(wěn)定性怎么樣
讓人最為擔(dān)憂的是預(yù)混試劑在長(zhǎng)期保存的情況下，酶活是否會(huì)出現(xiàn)下降的情況。優(yōu)質(zhì)的即用型產(chǎn)品運(yùn)用凍干或者特殊緩沖液體系，于-20℃的環(huán)境當(dāng)中能夠穩(wěn)定存放超過(guò)12個(gè)月。部分產(chǎn)品甚至還支持在4℃的條件下進(jìn)行短期保存一周，即便經(jīng)過(guò)3至5次的反復(fù)凍融，擴(kuò)增效率依舊能夠維持在90%以上。在出廠之前每一個(gè)批次都會(huì)開(kāi)展加速老化測(cè)試，以此確保在運(yùn)輸以及存儲(chǔ)過(guò)程中的性能保持一致。
使用之前，要留意觀察試劑的顏色以及沉淀狀況。正常的即用型 PCR 試劑盒應(yīng)當(dāng)是澄清的或者稍微帶有乳光的液體，要是出現(xiàn)絮狀物體亦或是顏色變黃，那就表明可能已經(jīng)產(chǎn)生降解。另外，分裝以后要盡快把它放回低溫環(huán)境之中，防止在室溫的情況下超過(guò) 30 分鐘。依照這些習(xí)慣去操作，你基本不會(huì)擔(dān)憂穩(wěn)定性出現(xiàn)問(wèn)題。
即用型PCR試劑盒使用注意點(diǎn)
即使省掉了配液步驟，然而模板質(zhì)量以及引物設(shè)計(jì)依舊決定著成敗，即使用型試劑于模板純度要求較為低些，能夠容忍一定數(shù)量的蛋白質(zhì)或者鹽離子干擾，可是過(guò)度降解的DNA仍然會(huì)致使擴(kuò)增失敗，提議每次實(shí)驗(yàn)設(shè)定陽(yáng)性對(duì)照以及陰性對(duì)照，以便于快速定位問(wèn)題究竟是出在試劑方面還是樣本方面。
不同品牌的、那種即可以直接使用的PCR試劑盒，其鎂離子濃度以及熱啟動(dòng)機(jī)制方面的差異是比較大的。當(dāng)首次去使用某一款產(chǎn)品的時(shí)候，最好是依照說(shuō)明書(shū)所推薦的退火溫度以及循環(huán)參數(shù)，先去做梯度測(cè)試。有一部分產(chǎn)品是需要對(duì)熱啟動(dòng)酶進(jìn)行預(yù)激活的，5分鐘95℃這樣的加熱步驟是不能夠省略掉的。另外，當(dāng)擴(kuò)增片段超過(guò)3kb的時(shí)候，普通的、那種即可以直接使用的試劑可能會(huì)顯得力不從心，此時(shí)應(yīng)去選擇專門(mén)的長(zhǎng)片段版本。
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