針對紫外光，物質(zhì)展現(xiàn)出特征吸收，基于此紫外法生化試劑盒展開定量分析，它是實驗室用于檢測酶活性的常用工具，也是檢測底物濃度的常用工具，還是檢測代謝產(chǎn)物的常用工具。該方法操作簡便，并且無需顯色劑，特別適宜飛速進行的篩查，也合適針對批量樣本予以測定。
紫外法原理是什么
紫外法借助特定化合物于紫外區(qū)，也就是通常所說的260nm或者340nm處的吸收峰，來推算該化合物的含量。舉例來說，NADH在340nm這個位置存在強吸收，當它被氧化轉(zhuǎn)變?yōu)镹AD+的時候，吸光度會隨之下降，通過對吸光值變化進行追蹤，便能夠計算出酶促反應的速率。掌握這一原理，能夠幫助你更加準確地解讀實驗結(jié)果。
如何選擇合適試劑盒
一開始要去確認那等待檢測的樣本的類型，以及那檢測的指標，像是血清，比如細胞裂解液，又或者是植物提取物。接著去查看試劑盒的線性范圍，要保證其能夠覆蓋你樣本的預期濃度。與此同時要留意檢測波長是不是與你的紫外分光光度計相匹配，有的試劑盒需要340nm，有的試劑盒則需要260nm。優(yōu)先去挑選標準品齊全、質(zhì)控數(shù)據(jù)完善的品牌。
操作步驟常見誤區(qū)
加樣順序常常被忽略了，混勻方式同樣也常被忽視。要嚴格依據(jù)說明書，先加入緩沖液，接著再加入樣本，最后才添加底物，以此來避免反應提前啟動?；靹虻臅r候，不要采用渦旋震蕩的方式，轉(zhuǎn)換成輕彈管壁或者緩慢顛倒的做法，防止氣泡對光路產(chǎn)生影響。每次進行檢測之前，要用空白對照來調(diào)零，比色皿的光面必須保持潔凈，手指千萬不要觸碰透光面。
結(jié)果偏差如何排除
要是重復測定值出現(xiàn)波動較大的情形，首先得查看試劑盒有沒有失效，因為凍干粉沒有按照要求密封保存大概率會出現(xiàn)吸潮的狀況。接著要瞧瞧反應溫度是不是保持恒定，畢竟紫外法大多依賴酶促反應，一旦 37℃偏差超出±0.5℃就會對速率產(chǎn)生顯著影響。另外還得排除樣本里的內(nèi)源干擾物，像血紅蛋白在 340nm 同樣存在吸收現(xiàn)象，這種情況下可以運用樣本空白來扣除本底。
