免疫吸附測定酶聯(lián)法乃科研實(shí)驗(yàn)室里極為常用的蛋白定量技術(shù)當(dāng)中的一種，然而試劑盒品牌數(shù)量眾多，參數(shù)繁雜，要是選錯(cuò)盒子了，不但會浪費(fèi)樣本，還極有可能致使整個(gè)實(shí)驗(yàn)得推翻重新做。下面從實(shí)際運(yùn)用的角度來分享四個(gè)關(guān)鍵要點(diǎn)，以此幫你躲開常見問題。
如何挑選靠譜科研ELISA試劑盒
評估靈敏度跟檢測范圍是不是契合你的樣本濃度，先去預(yù)估目標(biāo)蛋白于樣本里的大概含量，像血清樣本一般處于幾十至幾百pg/mL，如此靈敏度就得達(dá)到10pg/mL以下，檢測范圍要涵蓋預(yù)估值，同時(shí)存有上下余量，接著查看特異性驗(yàn)證數(shù)據(jù)，出色的供應(yīng)商會給出交叉反應(yīng)以及干擾測試報(bào)告，證實(shí)抗體跟其他相似蛋白不存在結(jié)合。
樣本類型決定試劑盒選擇
各種各樣不同的試劑盒，對于樣本基質(zhì)，像是血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等等，它們之間的兼容性，存有著極大的差異。有的試劑盒僅僅只驗(yàn)證過細(xì)胞上清，當(dāng)直接拿去用于血清樣本的時(shí)候，基質(zhì)效應(yīng)會把結(jié)果扭曲。在購買之前，務(wù)必要去確認(rèn)說明書當(dāng)中的“樣品驗(yàn)證”列表，是否包含你所擁有的樣本類型。要是樣本是血漿，還需要去留意抗凝劑，像EDTA、肝素或者檸檬酸鈉，是否會對試劑盒產(chǎn)生干擾。
實(shí)驗(yàn)操作關(guān)鍵步驟不能省
拿到試劑盒之后，要先展開預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定最佳稀釋倍數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)品務(wù)必要做雙復(fù)孔，樣本建議設(shè)置單孔并加一個(gè)隨機(jī)復(fù)孔。洗板環(huán)節(jié)是最容易被忽視的：洗液要注滿每一個(gè)孔，靜置30秒之后再吸干，重復(fù)5次，防止殘留液體致使背景增高。顯色時(shí)間要嚴(yán)格按照說明書來控制，溫度恒定在37℃會縮短顯色時(shí)間，需要提前通過預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索。
數(shù)據(jù)異常如何快速排查
要是標(biāo)準(zhǔn)曲線R2比0.99小，那就先去查看標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)孔CV值是不是超過了8%。倘若樣本OD值都比最低標(biāo)準(zhǔn)品低，那就考慮對樣本進(jìn)行濃縮或者換用靈敏度更高的試劑盒。一旦出現(xiàn)邊緣效應(yīng)（也就是四周孔OD值不正常），這表明孵育的時(shí)候沒加蓋或者溫育箱里溫度不一樣，此時(shí)應(yīng)改用濕盒并且加蓋膜。反復(fù)凍融的試劑盒組件（像酶標(biāo)抗體）同樣會致使信號降低，建議進(jìn)行分裝保存。
你認(rèn)為于科研用 ELISA 試劑盒運(yùn)用之時(shí)，哪一個(gè)具體的環(huán)節(jié)是最易于出現(xiàn)問題的呢？歡迎在評論區(qū)域交流分享屬于你的實(shí)戰(zhàn)經(jīng)歷與體驗(yàn)。
