用作實驗室常見免疫分析工具的ELISA檢測試劑盒，被廣泛運用于食品領域痕量物質(zhì)檢測，也被廣泛運用于環(huán)境領域痕量物質(zhì)檢測，還被廣泛運用于科研領域痕量物質(zhì)檢測。其核心原理是借助抗原抗體特異性反應，以及利用酶催化顯色信號放大，進而達成目標物的定性分析或者定量分析。正確地選擇試劑盒并且正確地使用試劑盒，直接關聯(lián)到數(shù)據(jù)的準確性以及實驗效率。
ELISA檢測試劑盒選購注意什么
首先，得明確檢測指標以及樣本類型。不同的試劑盒適配血清、組織勻漿、細胞上清或者環(huán)境水樣等，一定要核對說明書里的樣本適用范圍。其次，要關注靈敏度與檢測范圍：靈敏度決定著最低檢出限，并且線性區(qū)間應該覆蓋樣本預期濃度。最后，查看批間差和批內(nèi)差，一般要求變異系數(shù)低于10%才行穩(wěn)定。
如何保證ELISA實驗操作規(guī)范
最容易引入誤差的環(huán)節(jié)乃是加樣，建議運用校準過的多道移液器，且要保持每孔加樣的角度以及速度一致，孵育的時候需要使用封板膜來避光，溫度要控制在25℃或者37℃恒定不變，避免產(chǎn)生邊緣效應，洗板的次數(shù)以及浸泡的時間不可以隨意改動，殘留的液體能夠用吸水紙輕輕拍打來去除，顯色之后要立即加入終止液，并且要盡快在450nm波長讀取吸光度。
ELISA數(shù)據(jù)結果分析常見誤區(qū)
標準曲線得運用四參數(shù)或者線性擬合才行，其R值要達到0.99以上。有部分操作者直接越過復孔去取均值，如此會將偶然誤差給掩蓋掉。要是樣本濃度超過了標曲上限位置，那就應該稀釋然后再次進行測量，不能夠自己去進行外推計算。另外，非常高的值可能源于殘留的洗滌液或者底物受到污染，而陰性孔出現(xiàn)顯色情況通常表明封閉不夠充分或者二抗存在交叉反應。
試劑盒儲存與效期管理技巧
保存在二至八攝氏度是未開封試劑盒的要求，反復凍融是被禁止存在的情況。若結晶于濃縮洗滌液出現(xiàn)了，可用三十七攝氏度溫育使其溶解后再作使用。酶標板與終止液要避免強光直接照射，若變色為藍那顯色底物已然失效。抗體和標準品在開封之后要進行分裝，日期需標記，建議在一個月內(nèi)用完。每次實驗都要記錄批號以及剩余量，防止因不同批次混合使用而致使數(shù)據(jù)產(chǎn)生偏差。
你有沒有碰到過，標準曲線相關系數(shù)未達標的狀況呢？那時具體是怎樣去排查并解決的呀？
