如何選擇合適試劑盒
倘若面對(duì)市場里那一堆五花八門的PCR擴(kuò)增試劑盒，那么首先就要確切地弄清楚自身的實(shí)驗(yàn)需求。不同的試劑盒針對(duì)的模板類型存在頗為顯著的差異，比如說普通DNA模板、高GC含量模板或復(fù)雜結(jié)構(gòu)模板均有專門的配方。建議先去查看產(chǎn)品說明書中標(biāo)明的適用樣本范圍，而后再去對(duì)比自身樣本的特性，以免因?yàn)槠ヅ洳缓线m而致使擴(kuò)增失敗。
擴(kuò)增效率怎樣提高
使擴(kuò)增效率得以提升的關(guān)鍵之處在于酶活性以及反應(yīng)體系所進(jìn)行的優(yōu)化，優(yōu)質(zhì)的PCR擴(kuò)增試劑盒會(huì)給出高保真DNA聚合酶以及經(jīng)優(yōu)化的緩沖液，這能夠有效地減少非特異性條帶，在實(shí)際加以使用的時(shí)候，要嚴(yán)格依照說明書所推薦的退火溫度以及延伸時(shí)間來開展操作，與此同時(shí)要留意避免試劑出現(xiàn)反復(fù)凍融的情況，每次取用之后要馬上放回至-20℃進(jìn)行保存，如此方可最大限度地保持酶活效率。
結(jié)果重復(fù)性如何保證
想要保證結(jié)果具有重復(fù)性，得從兩方面著手，一方面是操作規(guī)范性，另一方面是試劑批次穩(wěn)定性。建議優(yōu)先去選擇那種經(jīng)過批次驗(yàn)證的PCR擴(kuò)增試劑盒，并且要記錄每一批試劑的CT值波動(dòng)范圍。與此同時(shí)，在進(jìn)行加樣過程的時(shí)候，使用帶濾芯吸頭以此來防止氣溶膠污染，針對(duì)每個(gè)樣本設(shè)置三個(gè)復(fù)孔，借助計(jì)算變異系數(shù)來評(píng)估重復(fù)性是不是在可接受區(qū)間之內(nèi)。
儲(chǔ)存運(yùn)輸注意事項(xiàng)
PCR擴(kuò)增試劑盒因?qū)囟染哂忻舾行?，所以運(yùn)輸以及儲(chǔ)存環(huán)節(jié)會(huì)直接對(duì)試劑性能產(chǎn)生影響，先檢查收貨時(shí)冰袋是不是沒有完全融化，試劑管有沒有破損，長期儲(chǔ)存得放置于-20℃恒溫冰箱，防止溫度出現(xiàn)波動(dòng)，短期使用能夠暫存于4℃，不過不應(yīng)超過一周，分裝操作可減少反復(fù)凍融造成的損傷，每次僅取出需要的量，剩余部分馬上回凍。
